潔凈室沉降菌檢測標準操作規程

⒈ 目的：建立沉降檢測的標準操作程序，用以規范員工的檢測操作。

⒉ 范圍：適用于公司內部生產潔凈區內的沉降菌檢測工作

⒊ 責任：生產部、生產車間、質量管理部、QC檢驗室主任、檢驗員對本規程的執行負責。

⒋ 檢測依據：YY/T0188.6－1995藥品檢驗操作規程，第6部分，藥品生物測定法。

⒌ 內容：

5.1 設備：高壓消毒鍋、恒溫培養箱；

5.2 培養基及平皿制備：

5.2.1 培養皿：一般采用￠90mm×15mm的硼硅酸玻璃培養皿。

5.2.2 培養基一般采用普通肉湯瓊脂培養基或其它藥典認可的培養基。

5.2.3 將培養皿置于121℃濕熱滅菌20分鐘或于180℃干熱滅菌2小時。

5.2.4將培養基加熱溶化，冷至45℃時，在無菌操作要求下將培養基注入培養皿，每皿約15ml。

5.2.5 待瓊脂凝固后，將培養基平面倒置于30～35℃恒溫培養箱中培養48小時，若培養基平面上確無菌落生長，即可供采樣用。

5.2.6 制備好的培養基平面宜在2～8℃的環境中存放。

5.3 采樣點：

5.3.1 采樣點的布置力求均勻，避免采樣點在某局部區域過于集中，按照潔凈區的面積大小，而制定最少采樣點數目，在滿足最少測點數的同時，還宜滿足最少培養皿數。

最少采樣點數目

5.3.2 工作區采樣點的位置離地0.8米～1.5米左右（略高于工作面）。并在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加采樣點。

5.3.3 測試標準

潔凈區微生物監控的靜態標準(a)如下：

潔凈區微生物監控的動態標準(a)如下：

5.4 測試規則

5.4.1 測試狀態

5.4.1.1 沉降菌測試前,被測試潔凈室（區）的溫濕度必須達到規定的要求，靜壓差、換氣次數、空氣流速必須控制在規定值內。

5.4.1.2 沉降菌測試前被測試潔凈室（區）已經過消毒。

5.4.1.3 測試狀態有靜態和動態二種，測試狀態的選擇必須符合生產的要求，并在報告中注明測試狀態。

靜態測試時潔凈室凈化空調系統已處于正常運行狀態。

動態測試時潔凈室已處于正常生產狀態。

5.4.2 測試人員

5.4.2.1 測試人員必須穿戴符合環境潔凈度級別的工作服.

5.4.2.2 靜態測試時，所有生產設備均已安裝就緒，但未運行，室內測試人員不得多于二人。

測試時間：對單向流，如100級凈化房間及層流工作臺，測應在凈化空調系統正常運行不少于10分鐘后開始；對非單向流，如10000級、100000級以上的凈化房間，測試應在凈化空調系統正常運行不少于30分鐘后開始。

5.4.2.3 動態測試時，所有生產設備按預定的工藝模式運行并有規定數量的操作人員在現場操作。

5.4.3 測試步驟

5.4.3.1 采樣方法:將已制備好的培養皿按采樣點的布置要求放置，打開培養皿蓋，使培養皿表面暴露0.5小時 ，再將培養皿蓋蓋上后倒置。

5.4.3.2 培養：全部采樣結束后，將培養皿倒置于恒溫培養箱中，在30～35℃培養，時間不少于48小時。

5.4.3.3 菌落計數：用肉眼直接計數、標記或在菌落計數器上點記，然后用5～10倍放大鏡檢查，有無遺漏。若培養皿上有二個以上菌落重疊，可分辨時以二個以上菌落數計數。

5.5 注意事項：

5.5.1 測試用具要做無菌處理，以確保測試的可靠性，正確性。

5.5.2 采取一切措施，防止人為對樣本的污染。

5.5.3 對培養基、培養條件及其它參數做祥細的記錄。

5.5.4 計數時一般用透射光對培養皿背面或正面仔細觀察，不要漏記培養皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落與培養基沉淀物的區別。必要時，用顯微鏡鑒別。

5.5.5 采樣前應仔細檢驗每個培養皿的質量,如發現變質、破損或污染的應剔除。

5.6 結果計算：

用計數方法得出各個培養皿的菌落數，按下式計算：

          M1+M2+………+Mn

平均菌落M=————————

                   n               

式中：M--平均菌落數

M1--1號培養皿菌落數

M2--2號培養皿菌落數

Mn--n號培養皿菌落數

n--培養皿總數

5.7 結果評定：用平均菌落數判斷（區）空氣中微生物。

5.7.1 潔凈室（區）內的平均菌落數必須低于所選定的評定標準。

5.7.2 若某潔凈室（區）內的平均菌落數超過評定標準，則必須對此區域先進行消毒，然后重新采樣兩次，測試結果均須合格。

5.8 記錄：

5.8.1 測試報告中應記錄房間溫度、相對濕度、壓差及測試狀態。記錄必須有日期和實驗員簽名，并交質量管理科會簽。

5.8.2 記錄本應保留至最后一次記錄后的二年。

5.8.3 存檔處必須在記錄本中注明。